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    CRISPR/Cas9

    CRISPR/Cas9(集群规则间隔的短回文重复/Cas9)是一种适用于哺乳动物细胞基因组编辑的细菌免疫系统。Cas9是一种可编程的核酸酶,通过结合约20个核苷酸的重组“指导性RNA”(gRNA)与靶位点结合而使DNA中的双链断裂(DSB)。由Cas9产生的DSB通常通过细胞易错的非同源末端连接(NHEJ)途径修复,导致小的插入或缺失(插入)。绝大多数的插入片段改变阅读框架,引入提前终止密码子或导致mRNA的无义介导衰变 - 有效地“敲除”基因。CRISPR / Cas9系统在特定基因编辑方面已经有了大量进展,并且已经成功用于修饰人类和其他生物体的游离基因组。CRISPR/Cas9系统利用原核RNA引导的可编程核酸酶,可在特定位点在主导RNA的指导下进行双链DNA断裂(DSB)。该DSB过程取决于两个基本组分的共表达:导向RNA(gRNA)和Cas9核酸酶。制作特定的DSB可以通过易错的非同源末端连接(NHEJ)或同源定向修复(HDR)触发DNA修复。在存在CRISPR/Cas9系统的情况下,NHEJ抑制剂SCR7被证明可以将哺乳动物细胞中Cas9介导的HDR的效率提高至少7倍。通过CRISPR/Cas9编辑基因组已成为一种有效且可靠的方法,可以对活细胞基因组进行精确,有针对性的改变。

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